細胞在培養瓶長成緻密單層後，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。 傳代培養也是一種將細胞種儲存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞株直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化後才能分瓶。

材料和試劑

1。細胞：貼壁細胞株

2。試劑：0。25％胰酶、1640培養基（含10％小牛血清）

3。儀器和器材：倒置顯微鏡，培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

初代組織塊培養法

1。剪下：把組織小塊置於小燒杯或青黴素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血汙，吸靜Hanks液，用眼科剪反覆剪下1mm3塊為止。

2。擺佈：用彎頭吸管吸取若干小塊，置於培養瓶中，用吸管彎頭把組織小塊擺佈在培養瓶底部，小塊相互距離以0。5cm為宜，每一25ml培養瓶底可擺佈20~30塊。

3。輕輕翻轉培養瓶，另瓶底向上，注意翻瓶時勿另組織小塊流動，塞好瓶塞，置36。5℃溫箱培養2小時左右（勿超過4小時），使小塊微乾涸。

4。培養：從微箱中取出培養瓶，開塞，46度斜持培養瓶，箱瓶底腳部輕輕注入培養液少許，然後緩緩再把培養瓶翻轉過來，讓培養液慢慢覆蓋附於瓶地上的組織小塊。置溫箱中靜止培養。待細胞從組織塊游出數量增多後。再補加培養液。

傳代培養法

操作步驟

1。吸除培養瓶內舊培養液。

2。向瓶內加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。

3。置溫箱中2~5分鐘，當發現細胞質回縮，細胞間隙增大後，立即終止消化。

4。吸除消化液，向瓶內注入Hanks液數毫升，輕輕轉動培養瓶，把殘餘消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時，動作要輕，以免把已鬆動的細胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液單獨消化，吸除胰蛋白酶液後，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養液。

5。用吸管吸取營養液輕輕反覆吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。

6。計數板計數後，把細胞懸液分成等份分裝入數個培養瓶中，置溫箱中培養。

細胞株無菌操作注意事項

1。操作前要洗手，進入超淨臺後手要用75%酒精或0。2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。

2。點燃酒精燈，操作在火焰附近進行，耐熱物品要經常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時間不能太長，以免退火，並冷卻後才能夾取組織，吸取過營養液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。

3。操作動作要準確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動，增加汙染機會。

4。不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺面上用品要佈局合理。

5。瓶子開口後要儘量保持45℃斜位。

6。吸溶液的吸管等不能混用。

細胞要養好就要用好血清。如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細胞培養，尤其適合難養細胞，如：幹細胞、肝細胞，神經細胞，原代培養、細胞融合、轉染細胞等。它在國內市場經歷十幾年，被眾多科研工業客戶反覆選擇，也是細胞典藏等重大專案十幾年的供應品牌。

文章來源於： 微生物技術應用

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