Tubulin porcine brain，T240-DX——微管蛋白（豬腦， 純度>99%）採用Shelanski等人的方法從豬腦中純化出微管蛋白，並用陽離子交換層析進一步純化到99%以上的純度。白色凍乾粉供應。

一、Tubulin porcine brain的用途

主要表現在四個方面：

1。抗微管蛋白配體的IC50和EC50測定；

2。微管結合研究；

3。微管蛋白單體結合研究；

4。HDAC6研究；

5。微管啟用的運動蛋白atp酶分析。

二、Tubulin porcine brain的材料組成

採用Shelanski等人的方法從豬腦中純化出微管蛋白，並用陽離子交換層析進一步純化到99%以上的純度。白色凍乾粉供應。

該產品具有完全的聚合活性，採用zhuanli技術進行凍幹以提高穩定性和使用壽命。T240在4°C乾燥條件下穩定1年。如果您的專案需要相同批次的微管蛋白以獲得一致的結果，強烈建議您批次購買該產品，以節省時間和金錢。本品可替代我們的高純度牛微管蛋白產品（Cat。#TL238、T238和T237），並以相同的方式工作。

三、Tubulin porcine brain的純度

透過SDS-PAGE凝膠上的蛋白質掃描密度測定。樣品純度>99%。

四、Tubulin porcine brain的生物活性

微管蛋白的一個單位定義為5。0 mg純化蛋白（由精密紅色高階蛋白分析試劑cat測定）。#ADV02）。透過微管蛋白聚合試驗評估T240的生物活性。微管蛋白聚合成微管的能力可以透過觀察340nm處微管蛋白溶液的光密度增加來觀察。當使用分光光度計路徑長度為0。8 cm（1/2面積96孔板中的樣品體積為180l）時，一般微管蛋白緩衝液中的5 mg/ml微管蛋白溶液加上5%甘油和1 mM GTP，應在30分鐘內獲得0。75-1。10的OD340 nm讀數。

需要注意的是，微管蛋白減去甘油在G-PEM緩衝液中不會聚合，直到微管蛋白濃度非常高（>10 mg/ml）。即使在這些濃度下，聚合也相對緩慢。在低濃度微管蛋白-甘油的情況下，可透過新增聚合促進化合物（例如甘油、紫杉醇或二甲基亞碸）實現高效聚合。

五、關於微管蛋白的兩個問題

Q1：儲存微管蛋白以確保最大的穩定性和活性的正確方法是什麼？

A：微管蛋白凍乾產品的建議儲存條件為4°C，並新增乾燥劑，以保持溼度小於10%的溼度。在這些條件下，蛋白質可以穩定6個月。凍幹蛋白質也可以在-70°C下乾燥儲存，在那裡它可以穩定6個月。但是，在-70°C時，管蓋上的橡膠密封件可能會破裂並進入溼氣。因此，我們建議在4°C下儲存。如果在-70°C下儲存，如果使用這種儲存條件，則必須在凍幹蛋白質中加入乾燥劑。按照指示重組蛋白質後，應將G-PEM緩衝液中的濃縮蛋白質等份，在液氮中快速冷凍，並在-70°C下儲存（穩定6個月）。注：在液氮中快速冷凍微管蛋白是非常重要的，因為其他冷凍方法會導致活性顯著降低。在室溫水浴中快速解凍1分鐘。避免反覆凍融迴圈。

Q2：為什麼細胞骨架推薦使用普通微管蛋白緩衝液和GTP來恢復微管蛋白？

A：為了維持微管蛋白和微管蛋白的構象，我們推薦使用GTP+tubulin單體。對於再懸浮，我們建議使用普通微管蛋白緩衝液（Cat。#BST01-001），包括80 mM管道，2 mM MgCl2，1 mM EGTA，pH 7。0，補充1 mM GTP（Cat。#BST06-001）。微管蛋白需要GTP和鎂離子來維持適當的穩定性和構象，即使是單體狀態。聚合過程中還需要GTP，因為它在微管蛋白聚合過程中的水解是發生聚合所必需的。EGTA是鈣的螯合劑，是微管蛋白聚合的有效抑制劑。甘油通常被新增到5-10%的最終濃度，以增強聚合；然而，甘油不是維持生物活性微管蛋白所必需的，在重組和儲存微管蛋白時也不需要包含甘油。在對重組微管蛋白進行分批儲存時，必須在濃度大於6 mg/ml的液氮中對微管蛋白進行等分和快速冷凍，以保持微管蛋白的生物活性。然後，應將等分試樣儲存在-70°C下。解凍等分試樣時，應在室溫水浴中快速解凍，並將其放在冰上，直到試驗使用之前。

文章來源：每日生物評論

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